6月13日，國(guó)際學(xué)術(shù)期刊Nucleic Acids Research在線發(fā)表了中國(guó)科學(xué)院分子細(xì)胞科學(xué)卓越創(chuàng)新中心(生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所)周小龍研究組的最新研究成果“Eukaryotic AlaX provides multiple checkpoints for quality and quantity of aminoacyl-tRNAs in translation”。該項(xiàng)研究鑒定了真核生物蛋白質(zhì)合成速度與保真性的多重調(diào)控因子AlaX。

蛋白質(zhì)合成的速度與保真性決定了遺傳信息的正確傳遞，對(duì)于細(xì)胞正常的生命活動(dòng)具有重要意義。速度或保真性紊亂會(huì)導(dǎo)致多種人類疾病，包括神經(jīng)退行性疾病與先天性心臟病等。氨基酰-tRNA合成酶(aaRS)需要識(shí)別正確的氨基酸與tRNA底物，合成正確的氨基酰-tRNA (例如Ser-tRNA^Ser)。由于氨基酸底物結(jié)構(gòu)的高度相似性，aaRS時(shí)常誤活化體積較小的非對(duì)應(yīng)氨基酸，導(dǎo)致誤氨基酰-tRNA的產(chǎn)生(例如Ser-tRNA^Ala, Ser-tRNA^Thr等)。約一半的aaRS進(jìn)化過(guò)程中，通過(guò)招募編校結(jié)構(gòu)域，催化編校反應(yīng)(editing)水解誤氨基酰-tRNA，以確保蛋白質(zhì)合成的保真性。由aaRS催化的編校反應(yīng)稱為順式編校(cis-editing)。例如丙氨酰-tRNA合成酶(AlaRS)和蘇氨酰-tRNA合成酶(ThrRS)的編校結(jié)構(gòu)域可以通過(guò)順式編校分別水解Ser-tRNA^Ala和Ser-tRNA^Thr。

由aaRS介導(dǎo)的順式編校不足以保證蛋白質(zhì)合成的保真性，因此在三界生物中，還普遍存在一類分子量較小，與aaRS的編校結(jié)構(gòu)域同源的蛋白質(zhì)分子。這類分子不具備氨基?；钚?，其中的某些成員已經(jīng)被證明可以水解對(duì)應(yīng)aaRS產(chǎn)生的誤氨基酰-tRNA，進(jìn)一步確保了遺傳信息的精準(zhǔn)傳遞。這類蛋白質(zhì)稱為反式編校因子，其介導(dǎo)的編校反應(yīng)稱為反式編校(trans-editing)。

真核生物中，由Aarsd1基因編碼的蛋白質(zhì)AlaX，與AlaRS和ThrRS的編校結(jié)構(gòu)域同源。前人的研究揭示了細(xì)菌和古菌來(lái)源的AlaX主要水解Ser-tRNA^Ala，只作為AlaRS的反式編校因子發(fā)揮作用。但對(duì)于真核生物AlaX潛在的編?；盍?，編校底物與生物學(xué)功能知之甚少。

在該研究中，通過(guò)純化和體外重組人AlaX以及酵母AlaX酶活力，發(fā)現(xiàn)AlaX是一個(gè)具有顯著編?；盍Φ姆词骄幮Ｒ蜃?；AlaX具有嚴(yán)格的氨基酸特異性，只能水解接載有Ser的tRNA；發(fā)現(xiàn)AlaX可以水解誤氨基?；?/span>tRNA，包括Ser-tRNA^Ala與Ser-tRNA^Thr；AlaX發(fā)揮其編校功能不依賴于tRNA的結(jié)構(gòu)和序列，但依賴于關(guān)鍵的C-Ala結(jié)構(gòu)域。通過(guò)構(gòu)建Aarsd1基因敲除的HEK293T細(xì)胞系和AlaX基因敲除的酵母細(xì)胞株，發(fā)現(xiàn)敲除細(xì)胞中， mRNA翻譯存在大量的Ala>Ser和Thr>Ser的氨基酸誤摻；敲除細(xì)胞系對(duì)不同的壓力刺激產(chǎn)生截然不同的響應(yīng)；細(xì)胞功能上的變化可以通過(guò)表達(dá)具有編?；盍Φ?/span>AlaX，AlaRS或ThrRS挽救。尤為意外的是，發(fā)現(xiàn)AlaX可以高效水解細(xì)胞內(nèi)由絲氨酰-tRNA合成酶(SerRS)合成的正確的氨基酰化tRNA (Ser-tRNA^Ser)和硒代半胱氨酸生物合成途徑中必須的中間產(chǎn)物Ser-tRNA^Sec；敲除Aarsd1基因可以顯著影響Ser密碼子的解碼速度，提示AlaX參與蛋白質(zhì)合成速度的調(diào)控。

本研究系統(tǒng)闡明了真核生物反式編校因子AlaX的編校機(jī)制；揭示了AlaX同時(shí)作為AlaRS、ThrRS與SerRS共有的反式編校因子，對(duì)于蛋白質(zhì)合成速度與保真性發(fā)揮多重調(diào)節(jié)作用。本研究加深了人們對(duì)于真核生物蛋白質(zhì)合成機(jī)理的認(rèn)識(shí)。

分子細(xì)胞卓越中心博士研究生李子涵為論文第一作者，分子細(xì)胞卓越中心/國(guó)科大杭州高等研究院周小龍研究員為論文通訊作者。該研究獲得了中國(guó)科學(xué)院先導(dǎo)B、國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃、基金委和上海市科委的經(jīng)費(fèi)資助。感謝國(guó)家蛋白質(zhì)科學(xué)中心(上海)李沂霖博士和殷躍博士對(duì)本研究提供的技術(shù)支持。感謝法國(guó)斯特拉斯堡大學(xué)Gilbert Eriani教授對(duì)本工作提出的建議。感謝分子細(xì)胞卓越中心分子生物學(xué)技術(shù)平臺(tái)、細(xì)胞分析技術(shù)平臺(tái)和化學(xué)生物學(xué)技術(shù)平臺(tái)的支持與幫助。

文章鏈接: https://doi.org/10.1093/nar/gkae486

AlaX在真核生物蛋白質(zhì)合成速度與保真性中發(fā)揮多重調(diào)控作用